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体外诊断试剂产品注册技术审评报告

产品中文名 称：脑炎/脑膜炎多重病原体核酸联合检测 试剂盒（封闭巢式多重 PCR 熔解曲线法） 

产品英文（原文）名称：FilmArray® Meningitis/Encephalitis (ME) Panel 

产品管理类 别：第三类 

申 请 人 名 称：拜奥法尔诊断有限责任公司 BioFire Diagnostics, LLC 

国家药品监督管理局

医疗器械审评中心

基本信息

 一、申请人名称 

拜奥法尔诊断有限责任公司BioFire Diagnostics, LLC 

二、申请人住所 

515 Colorow Drive, Salt Lake City, Utah 84108, USA 

三、生产地址 

515 Colorow Drive, Salt Lake City, Utah 84108, USA

技术审评概述 

一、产品概述 

（一）产品主要组成成分 本试剂盒包含以下组分，主要组成成分见表 1。 

表 1 试剂盒主要组成成分

（二）产品预期用途 

本产品用于体外定性检测具有脑膜炎及/或脑炎体征及/或症 状的人群的脑脊液 (CSF)样本中的 14 种细菌、病毒和酵母菌的核 酸。包括：大肠埃希菌 K1 株、流感嗜血杆菌、单核细胞增生李 斯特菌、脑膜炎奈瑟菌（有荚膜）、无乳链球菌、肺炎链球菌； 巨细胞病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒 1 型、单纯疱疹病毒 2 型、 人疱疹病毒6 型、人双埃可病毒、水痘-带状疱疹病毒；新型隐球 菌（新生/格特）

中枢神经系统（CNS）感染是引发脑及/或脑周围的脑膜组 织炎症（即脑炎、脑膜脑炎；在此统称为 ME）的原因。约有 15% 的感染具有致死性，而其他可能会导致终身残疾，例如截肢、视 力和听力缺陷、癫痫和学习/记忆功能异常。本产品可用于从脑 脊液（CSF）中检测鉴定出 14 种潜在中枢神经系统感染相关病原 体。可在大约一小时左右通过本产品检测获得所测样本的结果。 本产品是诊断脑膜炎及/或脑炎相关的病原体的一种辅助手 段，所得检测结果应结合其他临床、流行病学和实验室数据使用。 检测的结果不应用作诊断、治疗或其他患者处置决策的唯一依据。 阳性结果不能排除与产品未涵盖的微生物存在共感染的情况。检 测到的病原体不一定是疾病的明确病因。阴性结果并不能排除中 枢神经系统（CNS）感染。 

（三）产品包装规格 

货号（RFIT-ASY-0118）：30 测试/盒;

 货号（RFIT-ASY-0119）：6 测试/盒。

（四）产品检验原理 

本产品采用多重巢式 PCR 扩增并结合熔解曲线分析，对通 过腰椎穿刺获得的脑脊液样本中的上述 14 种病原体核酸进行检 测。 

产品是一种一次性封闭检测试剂，其中包含分离、扩增和检 测所需的所有成分。测试条的硬质塑料组件内装有冻干试剂。测 试条的软质塑料部分含有多个囊泡，在其中进行各个反应步骤。 

产品结构如下图所示。

用户将样本加载到测试条中，随后将测试条放入 FilmArray 系统，由仪器自动进行以下操作及检测：

 1.核酸纯化：核酸纯化发生在测试条的前三个反应区。样本 通过瓷珠进行机械研磨破碎，并配合相应化学试剂通过磁珠技术 进行样本中核酸的捕获、洗涤和洗脱释放。

 2.逆转录和第 1 轮多重 PCR：测试条检测的部分病原体属于 RNA病毒，因此在扩增前需运行逆转录步骤将病毒RNA转化为 cDNA。纯化后的核酸溶液与预热的预混试剂混合以启动逆转录 步骤和随后的多重PCR反应，第1阶段PCR的反应体系中包含数十 对引物，多个PCR反应同时在一个反应体系中进行，用于富集样 本中存在的病原体核酸片断。

 3.第 2 轮巢氏 PCR：第 1 阶段PCR反应的产物经稀释后与含 有DNA结合染料的第二轮PCR试剂混合。将该混合溶液分配到第2阶段PCR的102孔阵列当中。该阵列的各个孔位中已包含用于不 同病原体检测的引物（每种在不同的孔位中重复三次）和阳性质 控模板材料，用于检测各种待测病原体的特定核酸序列。第2阶 段PCR反应使用的巢式引物结合在第1阶段多重PCR反应特异性产 物内部，提高了反应的灵敏度和特异性。

4. DNA 熔解曲线分析：在第2阶段PCR反应之后，系统缓慢 升高温度并监测和分析第2阶段PCR反应阵列中每个孔的荧光来 生成熔解曲线。特定PCR产物解链时的温度（熔解温度或 Tm） 恒定且可预测，FilmArray 软件自动评估每个检测病原体在三个 重复孔中的数据来报告结果。

二、临床前研究概述 

（一）主要原材料 

1.主要原材料的选择 本产品的主要原材料包括：DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTPs、 引物等。引物由申请人设计并生产，其他主要原材料均购自外部 供应商。申请人选择有资质的供应商提供的原料，通过功能性试 验，确定了原材料的适用性，制定了各主要原材料的质量标准并 经检验合格。 

2.企业参考品和质控品设置情况 每个检测试剂均包含两个质控品：RNA 过程质控品和 PCR2 质控，在每次检测中随样本运行。RNA 过程质控品为真实样本， 即纯化的粟酒裂殖酵母。酵母菌为冻干形态，在装载样本后得以 溶解，并经历检测过程的各个阶段，包括裂解、核酸纯化、逆转录、第 1 轮 PCR、稀释、第 2 轮 PCR 和熔解曲线分析。阳性结果 表示测试条中的所有步骤均执行成功。PCR2 质控由一对退火的 互补寡核苷酸组成，在产品生产中与其他引物一起添加在阵列中， 参与 PCR2 扩增反应，用于确认 PCR2 扩增步骤中阵列填充和荧 光检测的正确性。 企业内部参考品包括阳性参考品和阴性参考品。阳性质控品 由涵盖检测范围内所有病原体不同亚型的混合物组成。阴性参考 品用于确保测试条未出现因污染或非特异性扩增而引起的非预期 的阳性结果。

 （二）生产工艺及反应体系研究

 申请人通过对试剂主要生产工艺如冻干工艺的研究，确定了 最佳生产工艺。申请人对反应体系中样本量、引物浓度、DNA 聚合酶、逆转录酶、dNTPs、离子的浓度以及逆转录的时间及温 度、PCR1 和 PCR2 的退火延伸时间及温度、循环数的选择等进 行优化，并通过验证最终确定了最佳反应体系。 

（三）分析性能评估

 本产品分析性能评估内容包括最低检出限、包容性、分析特 异性、精密度、干扰物质和竞争性抑制等。申请人提交了有效运 行 的 质 量 体 系 下 生 产 的 三 批 产 品 在 适 用 机 型 FilmArray、 FilmArray 2.0 和 FilmArray Torch 上进行了性能评估。

1.最低检出限 

通过对含有已知浓度的一种至五个微生物（细菌、病毒和酵 母菌）的系列稀释样本进行检测，对本产品的检出限进行预估。 

通过对含有预估检出限浓度分析物的样本进行 20 次重复检测， 来确认检出限。如果在 20 次重复检测中至少 19 次为阳性 (19/20=95%)，则可确认检出限。14 种病原体的检出限数据如下。

     选择能够代表测试条包容性的 101 个分离株进行检测，所选 分离株能够代表病原体相关的种属、亚种或血清型，在接近检出 限浓度的水平进行检测。结果显示测试条能正确检出所有分离株。 同时对本产品可以检测却无法进行实验测试的不常见的菌株或血 清型进行了生物信息学分析以预测其反应性，未观察到任何漏检 情形。